期刊简介
本刊系中国免疫学会会刊，创刊于1985年，由中国免疫学会主办，中国科协主管。本刊宗旨是为我国科研机构、高等院校及医药单位的免疫学工作者及相关工作人员服务，报道我国免疫学科最新研究成果，交流各分支学科间工作经验，介绍国内外免疫学科发展动态，推动我国免疫学科研、教学事业的发展。主要栏目设置有分子与细胞免疫学、遗传免疫学、肿瘤免疫学、抗感染免疫学、中医中药与免疫、移植免疫学，生殖免疫学、神经内分泌与免疫、兽医免疫学、临床免疫学、免疫学技术与方法、教学园地、述评、专题综述等，跟踪国内外免疫学研究的重点、热点、前沿等课题，组织专题讲座等。
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首页>中国免疫学杂志
- 杂志名称：中国免疫学杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中国免疫学会,吉林省医学期刊社
- 国际刊号：1000-484X
- 国内刊号：22-1126/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊方阵双效期刊期刊收录：JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), 哥白尼索引(波兰), 剑桥科学文摘, CA 化学文摘(美), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
靶向小鼠TNF-α基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定
赵颖杰；王吉波；辛苗苗；梁宏达；刘相萍；杨堃；隋爱华
关键词：RNA干扰, 慢病毒载体, 巨噬细胞, 肿瘤坏死因子-α
摘要：目的：构建靶向小鼠TNF-α基因的RNA干扰慢病毒载体，为RNA干扰基因治疗提供基础。方法：设计、合成3组靶向TNF-α基因的特异小干扰RNA （ siRNA）：siRNA1、siRNA2、siRNA3及阴性对照siRNA，体外转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7，用real-time PCR和ELISA法检测其对经脂多糖刺激的RAW264.7细胞表达TNF-α、IL-1β、IL-6的影响。筛选出特异且抑制性高的siRNA，根据其序列设计合成寡核苷酸链，构建表达短发卡RNA（ shRNA）的重组慢病毒质粒并测序，经鉴定质粒与包装质粒共转染293 T细胞生产慢病毒颗粒，计算病毒颗粒滴度。结果：①siRNA1、siRNA2、siRNA3组的TNF-αmRNA相对表达量分别为0.24±0.01、0.16±0.02、0.19±0.01，与阴性对照0.95±0.02相比差别均具有统计学意义（ F＝531.3， P＜0.001）；与阴性对照相比，mRNA表达抑制率分别为74.26％、83.09％、79.93％。siRNA1、siRNA2、siRNA3及阴性对照组的IL-1βmRNA或IL-6 mRNA相对表达量之间差别无统计学意义（F＝0.981，P＝0.9807＞0.05；F＝0.739，P＝0.5867＞0.05）。②siRNA1、siRNA2、siRNA3的TNF-α蛋白表达分别为（23.95±1.21）、（17.27±1.46）、（19.07±1.57） ng／ml 与阴性对照的（35.37±2.93）ng／ml相比，差别均具有统计学意义（F＝18.1，P＝0.0006＜0.001）；与阴性对照相比，TNF-α蛋白表达抑制率分别为32.29％、51.16％、46.08％。③以siRNA2序列设计、合成寡核苷酸链，构建重组慢病毒穿梭质粒，其PCR产物电泳结果为343 bp，空载体PCR产物306 bp；DNA测序显示pGCSIL-GFP-shRNA测序反应中断，但已显示部分插入序列。④转染后的293 T细胞，生长良好，荧光表达强，慢病毒滴度为2×106 TU／μl。结论：靶向小鼠TNF-α基因RNAi慢病毒载体构建成功。
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